引言：国内多个地区的温度较高、降水量较大，空气环境中的含水量较高，是生长真菌的绝佳环境条件。在此环境中，粮食生长极易受到真菌毒素的攻击。在粮食发生霉变后，会形成严重的经济损失。OTA不易转化，表现出较强的毒性，会侵害人体的肾脏、神经等部位，具有较强的致癌特征。OTA的状态平稳，具有较强的耐热性，不易分解。为此，测定各类粮食产品中的OTA含量，具有较高的研究价值。

1测定OTA的要求

各类粮食内的OTA含量要求，具体见表1^[1]。

表 1 各类粮食内的OTA含量要求（单位：ug/kg）

2 ELISA测定OTA的方法

2.1测定OTA的前期准备

选择某地区的农贸市场、粮食加工基地、粮食仓储区，从谷物、坚果等各类粮食中，收集100份粮食样本，以此综合测定该地区OTA的污染状况。在测定之前，准备了OTA标品，此产品的OTA含量不低于98%。准备ELISA测定用品，具体有酶标板、显色液等。备好酶标仪、离心机等各类设备，确保检测顺利。针对各类粮食样本，应给出不同的样本处理措施。一，处理谷物粮食样本时，需要进行粉碎、过筛等处理，每份样本称取5g，添加乙腈提取液，兑成混合液。提取处理时间为30min。提取处理后，再进行离心处理。二，处理坚果样本时，应除去坚果外表坚硬的果壳，取出坚果仁后，进行研磨破碎处理后，进入提取、离心流程。三，酒类样本采取稀释处理后，等待检测。

2.2测定方法

其一，准确称量OTA标品，选择磷酸盐缓冲液（下文简称“PBS”）给予处理，调配出多级浓度的标液，浓度范围在0至5ng/mL之间，共有4组参数：1组，0；2组，0.05ng/mL；3组，0.5ng/mL；4组，5ng/mL。其二，参照ELISA试剂检测用品的操作要求，将四组标品逐一添加在酶标板孔内，各孔添加100uL后，放置在恒温箱内等待1h，确保抗原、抗体的互相结合效果。其三，在孵育完成时，倒出酶标板内结合完成的液体，再利用PBS液体，给予清洗处理，循环清洗3次，每次清洗使清洗液处于孔中至少30s。清洗完成，利用拍板全面清除孔内液体。其四，添加酶标二抗，选择37℃的温度，开展45min的孵育处理。此次孵育后，再次清洁孔内液体。其五，清洁完成，添加底物显色液，设定15min显色时间，在显色到达目标点位后，添加终止液，不再继续反应。各个孔内分别添加50uL的终止液。其六，不再反应时，利用酶标仪测定长度，获取每个孔位对应的吸光度参数。

2.3测定结果

2.3.1 c、d相关性分析

如表2所示，是各组OTA标品的测定结果。

表 2 各组OTA标品的测定结果

运行Origin程序拟合各组参数，得出c、d的相互关系为：d=0.205c+0.062（R²=0.998）。R²表示两个变量的线性相关系数，该数值与1值相差不大时，表示两个变量之间的线性表现较好，能够保证OTA含量测定结果的精确性。

2.3.2该地区粮食样本的测定情况

该地区100份食品样本的OTA含量测定结果，见表3。

表 2 该地区100份食品样本的OTA含量测定结果

此次检测的谷物、坚果、酒品中，OTA含量均处于安全范围内，并未高于国内安全限值要求。

2.4检测准确性分析

选择OTA含量为零的标品，逐一添加不同层级的OTA含量，开展加标回收率测定分析。各个浓度的样品均开展5次检测，测得数据，取平均值。此次加标回收率参数处于87%至102%以内。由此说明：该地区利用ELISA方法，测定OTA含量，测定结果与实际相符，并不存在较大偏差。为此，OTA测定结果真实，检测结果能够真实反映该地区的粮食情况。

2.5检测方法的改进措施

在该方法使用期间，主要是样本处理、检测期间存在一定的干扰因素，具体包括：基质干扰、提取效率不高、试剂盒性能、人为处理不规范等。结合本次检测活动，梳理了OTA测定的质控方法，具体如下。其一，改进样本处理体系。采取净化措施，利用固相萃取柱，有效去除样本基质形成的干扰作用，防止基质与OTA反应，切实保证OTA测定结果符合实际。针对各类粮食，选择适用的基质改性剂，能够有效改变基质性能，有效防控基质干扰^[2]。其二，增强提取效果。处理各类样品，宜选择性能较好的提取溶剂。在测定坚果样本时，利用超声提取、涡旋振动联合的形式，能够有效增大溶剂、食品样本之间的接触空间，获取较好的提取效果，使测定结果精确。其三，在买入ELISA试剂检测用品时，全面加强供应单位的货品审核，测定试剂盒的功能，查看其质量报告。针对试剂盒开展抽检，确保检测用具的功能完好。其四，有序落实人员技术培训工作，使参与检测的人员，全部熟练掌握ELISA的操作方法。针对关键质量风险节点，要学会质量风控措施，出具全面的标准检测手册。在人员培训后，开展对应的技术考核工作，测定每位检测人员的技术掌握情况^[3]。在实际检测中，采取多样性措施，监督查看检测过程，及时消除不规范的测定操作，尽量规避人为操作不当问题。其五，改进检测方法。以ELISA为基础，选择其他检测方法，创建新型高效检测方案，充分发挥各类检测方法的技术优势。利用ELISA确定OTA含量异常的粮食样本，再用色质联用技术，精确测定OTA含量，以此精确获取粮食样本中的OTA含量数值。

结论：综上所述，在粮食生产、加工各个流程中，高温、降水等各类环境条件，均可能引发OTA污染问题。当食品内含有的OTA成分较多时，会形成饮食风险。在实践中，某地区利用ELISA方法，综合检测区域内的100份食品样本，测定结果无异常。由此证明：该地区的食品加工区、农贸市场各处食品，OTA含量尚处于安全状态。在ELSA方法研究中，尝试从样本处理、试剂盒质控、人员操作、技术方案等各个方面，逐一改善检测体系，以期获取更具参考性的OTA测定结果。

参考文献：

[1]杨圆圆,邓峥嵘,高仕超,等.基于孔雀石绿/核酸适配体的免标记荧光法检测中药中的赭曲霉素A[J].中国中药杂志,2024,49(07):1818-1825.

[2]郑香峰,王诗苡,陶佳欣,等.植物乳杆菌QH06清除赭曲霉素A的作用及其初步应用[J].现代食品科技,2023,39(06):270-276.

[3]邱婧,梁晟,李瑞莲,等.UPLC-MS/MS法检测苍耳子中的赭曲霉素A[J].中南药学,2019,17(12):2127-2129.