《中国药典（2020版）》与相关文献提出，在测定乙酰氨基酚与制剂含量时，使用四丁基氢氧化铵溶液为流动相反相离子对液相色谱法^[1]；但此方法存在一定不足，如四丁基氢氧化铵的色谱柱的吸附性很强，无法获取理想的流动相后峰形与柱效。本文将探究高效液相色谱法测定乙酰氨基酚的含量。

1.仪器与试药

1.1仪器

本研究使用仪器是高效液相色谱仪（型号：Waters2695；生产厂家：美国Waters公司），紫外线检测器（型号：Waters2998；美国Waters公司）；Empower色谱管理系统（生产厂家：美国Waters公司），电子天平（型号：XSR205DU；生产厂家：梅特勒），PH计（型号PD-10；生产厂家：梅特勒），数控超声波清洗器（型号：KQ-250DB；生产厂家：昆山超声仪器有限公司）。

1.2试药

乙酰氨基酚类药物来自于东北制药集团沈阳第一制药有限公司（国药准字H21020448）、成都倍特（批号201226）、昆明积大（批号230205）、海南日中天（批号03211104）。

乙酰氨基酚对照品（纯度为88.9%，批号：130503-202007）由中国食品药品检定研究院提供；乙腈和甲醇为HPLC级；磷酸氢二钾、磷酸二氢钾、盐酸为分析纯。

2含量测定方法确认

2.1系统适用性试验

流动相为0.025mol/L磷酸盐酸冲液（用磷酸调节pH至3.6）-乙腈（90:10）；色谱柱是Waters Symmetry C18柱，3.5um，150mm*4.6；柱温是35℃，流速是1.0ml/min；进样量是20uL，检测波长是254nm。取适量空白样品溶液、供试品溶液、对照品溶液、系统适用性溶液，在液相色谱仪中注入，完成测定，对色谱图详细记录。

2.2 制备溶液

包括制备系统适应性溶液、对照品溶液、供试品溶液、阴性样品溶液。

2.3 降解溶液

包括水解破坏、氧化破坏、碱破坏、酸破坏、光照破坏、加热破坏。

2.3方法学考察

包括专属性试验、耐用性试验、线性关系考察、检测限与定量限、精密度试验、稳定性试验、重复性试验、加样回收率。

2.4测定含量

取供试品溶液、对照品溶液各20uL，在液相色谱仪中注入，对色谱图详细记录，采用外标法进行乙酰氨基酚含量计算。参考《中国药典（2020版）》比较乙酰氨基酚含量结果。

2.5 质控策略

2.5.1药品杂质含量检测

目前，我国相关部门已经明确规定了药品的质量标准，检测人员对药品有效成分含量进行检测时很有必要同步检测其是否含有有害物质，如有有害物质，则需要判断该含量是否可以达到国家标准的具体要求。生产药品的过程中容易受到湿度与温度的影响，由此可知药品原材料容易催化多种类型的附加成分，这些成分中有可能含有有害物质。检测人员应在检验药品时严格地检验药物的附加成分，避免受到附加成分超标对药品的质量产生影响。比如，测定罗昔康含量时，因为该药物容易被水解与氧化，其水溶液的化学性质稳定性不强，因此可采用应用高效液相色谱法测定，操作时可选择0.01mol/L的盐酸甲醇，提高溶剂溶解性的同时也可以提高罗昔康溶液的稳定性，因此检测结果更好^[2]。可见，应用高效液相色谱法可以提高检测结果的检验精度，具有其他检验方法无可比拟的优势，从源头上提高我国药品质量的安全水平。

2.5.2中药质量检测

中药具有复杂的成分，增加了质量检测的难度，且无法通过传统的检测方法准确地检测。而高效液相色谱法的应用，可以解决中药成分多、分离难度大的问题，这也是测定重要有效成分有效的一种含量。高效液相色谱法的应用可以对中药中有效待测成分与其他杂质进行快速地分离，为了有效地检查中药质量、鉴别成分以及测定含量均提供有利的依据。比如，测定丹岑滴丸中的黄芩苷、隐丹参酮含量时，可以应用高效液相色谱法，分离度较高，且可以准确地定量，让传统定性检测工作中存在的不足得到弥补。由此可见，高效液相色谱法的应用，让传统的依靠看、尝、闻等鉴别中药性状特征的方法得到弥补，定量控制了中药中的有效成分，促进中药质量检测逐步朝着规范化、现代化与标准化方向发展。

2.5.3感冒药品检验

对于感冒药品的检测工作，患者容易出现各类不良的反应，该问题的出现与药品中含有降解产物、中间体、聚合物有很大的联系，很有必要限制感冒药品中的杂质。比如，定量分析乙酰氨基酚这一药物的杂质时，检测人员可应用高效液相色谱法测定，可在短期内分离药品的主要成分、降解产物以及相关物质，为限度控制该制制剂提供有利的条件。由此可见，感冒药品检验的过程中应用高效液相色谱法的过程中可以对药品中杂质的含量进行控制，为感冒药药效的保证提供有利的条件^[3]。

2.5.4药物鉴别

药物种类不同，其用药价值同样具有较大的差异。因此，检测人员很有必要科学地鉴定药物，确保可以物尽其用。药物鉴别的过程中应用高效液相色谱法有利于将时间与组分的性质与结构保留，以此当作药物定性的主要参数[5]。比如，鉴别南北五味子时，可借助高效液相色谱法测定两种五味子中的组分含量，使用C18柱，流动相配比为65:35的甲醇水，对流速进行控制，以1.0mL/min位移，控制检测的波长为250mm，可对南北五味子组分含量进行快速地鉴别。由此可见，药物鉴别的过程中可以应用高效液相色谱法，为开辟药物鉴别的新思路与新方法助力。

3结果

3.1系统适用性试验

供试品溶液与对照品溶液具有一致的主峰保留时间，乙酰氨基酚峰的理论塔板数是5162；乙酰氨基酚峰和热分解产物异构体分离度超过2.0。（如下图所示）

3.2测定含量

加样回收率试验可见，本次实验平均回收率为99.22%，面积相对标准偏差为0.5%，回收率良好，说明本方法测定含量结果准确可靠。详细如表1所示。

表1回收率测定结果（n=9）

3.3样品含量测定

配对t检验可见，《中国药典（2020版）》乙酰氨基酚含量结果与高效液相色谱法测定结果比较，差异P>0.05，无统计学意义，如表2所示。

表2检验结果与《中国药典（2015版）》比较（%）

3讨论

HPLC法是近年来发展起来的一项新的技术。通过对HPLC技术的研究和应用，HPLC技术在各种分析和分离技术中占有举足轻重的地位^[4]。HPLC技术利用高压液泵、高效固定相及高敏感检测器等所拥有的较高选择性、分离效能以及灵敏度，从而实现了自动化操作，从而极大地提升了分离分析的效率。HPLC技术的原理与常规液相色谱基本一致，但引进了更加先进的设备，对操作流程进行了优化，从而提高了物质管理效率及反应速率。高效液相色谱法可以生成一定的显色剂，用于鉴别、确定样品中的化学组成，并对样品进行分离、纯化。而且，高效液相色谱技术还可以从原料中提取出各种不需要的成分，对提高药品的品质具有很大的作用。高效液相色谱法在医药研究，环境分析，生物化学分析，食品检验等方面有着广阔的应用前景。高效液相色谱（HPLC）技术在药物成分分析、质量控制、合成及提纯等领域具有重要的意义^[5]。在环境分析中，高效液相色谱技术能够对有机污染物、重金属等污染物进行有效的分离与检测。在食物的分析中，高效液相色谱法可以对食物中的有害物质如添加剂，农药残留，重金属等进行分析。

高效液相色谱法（HPLC）是一种利用液体为流动相，在高压输液系统的作用下，将不同的溶剂混合进入色谱柱中进行试样分析的技术。HPLC的应用包含三个部分：高效微粒固定相、新型高压输液泵和高灵敏度检测器。其特点是具有高灵敏、高压、高效和高速的特点，临床应用范围广。在HPLC中，高效微粒固定相是关键因素。采用高效色谱填料、小口径柱和高压输液泵可提高分离效果和检测速度。高压输液泵将不同溶剂混合，泵入色谱柱中进行试样分析，以达到高效分离的目的。高灵敏度检测器则能够准确地检测出微小的分离结果，从而提高分析结果的准确性和可靠性。在临床应用中，HPLC可以应用于药物分析、环境监测、食品安全等多个领域。例如，在药物分析中，HPLC可以用于药物成分分离和纯度检测，能够准确地定量各种药物成分，从而保证药物的安全性和有效性。在环境监测中，HPLC可以用于分析各种有害物质，如重金属、有机污染物等，以保护环境和人类健康^[6]。在食品安全方面，HPLC可以用于检测食品中残留的农药、添加剂、毒素等，以保证食品的安全和健康。总之，HPLC作为一种高效分离技术，其应用范围广泛，具有很高的实际价值和应用前景。在未来的发展中，HPLC将继续发挥其独特的优势，为人类的生活和健康作出更大的贡献。

查阅文献发现，乙酰氨基酚的测定方法包括液相法、气相法、非水滴测定法，其中滴定法的专属性差；气相法的响应与分离良好，但存在较大进样误差；液相法检测能使用蒸发光检测器检测，提高定量准确度差。乙酰氨基酚含有弱碱性基团氨基与弱酸性基团羧基，因此对溶液pH值进行调节可促使解离状态改变，继而对反相色谱保留时间进行调节。本研究结果可见，pH值越高，乙酰氨基酚峰和异构体的理论塔板数、分离度更小，其原因可能是酸性环境下C18基因会断裂。本研究选择磷酸盐缓冲液的pH值是3.6，所获取的保留时间更合适，峰值、理论板数也更理想^[7]。本研究加样回收率试验可见，本次实验平均回收率为99.22%，面积相对标准偏差为0.5%，本规格回收率良好，说明本方法测定含量结果准确可靠。配对t检验可见，《中国药典（2020版）》乙酰氨基酚含量结果与高效液相色谱法测定结果比较，差异P>0.05，无统计学意义。

综上所述，高效液相色谱法测定乙酰氨基酚类药物的含量测定精密度良好，可以准确检测样品的含量。

参考文献：

[1] 陈芳,樊宝娟,呼延婷婷,等. 凉解感冒合剂质量标准研究[J]. 中国药业,2023,32(17):75-79.

[2] 董秋香,张月寒,刘翀,等. 桑菊感冒颗粒质量标准完善研究[J]. 中南药学,2023,21(2):520-525.

[3] 张芦燕,杨洁,钱一鑫,等. 基于HPLC法和指纹图谱的桑菊感冒片质量评价研究[J]. 医学信息,2023,36(7):139-142.

[4] 孙迎春,程卉,刘东风. 两种小儿抗感冒颗粒剂中胆红素含量测定方法的研究[J]. 海峡药学,2022,34(6):48-51.

[5] 胡秀虹,张廷辉,潘晓芸,等. 小儿感冒颗粒连翘苷的提取及含量测定研究[J]. 贵州科学,2022,40(4):38-43.

[6] 喻景. 药品检验过程中质量控制必要性及措施探究[J]. 养生保健指南,2019(7):325.

[7] 王喆,朱正华,张馨. RP-HPLC法测定银菊感冒胶囊中氨基比林的含量[J]. 中国民族民间医药,2021,30(15):32-35.